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細(xì)胞增殖檢測(cè)(MTT檢測(cè))服務(wù)

 發(fā)布時(shí)間:2019/2/28 點(diǎn)擊量:1976

MTT實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)介
       MTT法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)增殖的方法。
       檢測(cè)原理:活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO )能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)(或其他波長(zhǎng))處測(cè)定其光吸收值,在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值),來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。
       該方法靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)用,已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及細(xì)胞放射敏感性測(cè)定等等。
 
 
操作方法
貼壁細(xì)胞
1、收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度1000-10000孔,(邊緣孔用無(wú)菌PBS填充)。
2、5%CO2,37℃孵育,細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上,細(xì)胞貼壁后即可加藥,或兩小時(shí),或半天時(shí)間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午加藥.一般5-7個(gè)梯度,每孔100ul,設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔.建議設(shè)5個(gè),否則難以反應(yīng)真shi情況
3、5%CO2,37℃孵育16-48小時(shí),倒置顯微鏡下觀察。
4、每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5、終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
6、每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
7、同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)
 
懸浮細(xì)胞
1、收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1×106/ml,按次序?qū)ⅱ傺a(bǔ)足的1640(無(wú)血清)培養(yǎng)基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培養(yǎng)液稀釋 l?g/ml,需預(yù)試尋找*稀釋度,1:10-1:20);③需檢測(cè)物10ul;④細(xì)胞懸液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(邊緣孔用無(wú)菌水填充)。每板設(shè)對(duì)照(加100?(儲(chǔ)存液100 1640)。
2、置37℃,5%CO2孵育16-48小時(shí),倒置顯微鏡下觀察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4 h。(懸浮細(xì)胞推薦使用WST-1,培養(yǎng)4 h后可跳過(guò)步驟4),直接酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570nm(630nm校準(zhǔn))測(cè)量各孔的吸光值)
4、離心(1000轉(zhuǎn)x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570nm(630nm校準(zhǔn))測(cè)量各孔的吸光值。
5、同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜),每組設(shè)定3復(fù)孔。
 
結(jié)果示例
 
 
客戶提供
1、實(shí)驗(yàn)信息,包括細(xì)胞類型,細(xì)胞處理藥物和條件。
2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果要求等。
  
服務(wù)流程
1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見(jiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿意并達(dá)成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開(kāi)展實(shí)驗(yàn),按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題,提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。
  
我們的優(yōu)勢(shì)
1、多種細(xì)胞類型供實(shí)驗(yàn)需要,包括各種腫瘤細(xì)胞系,基因敲除細(xì)胞等等。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實(shí)驗(yàn)室。
4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。
 
咨詢與訂購(gòu)
感謝您選擇我們的服務(wù),如果您有任何問(wèn)題,請(qǐng)聯(lián)系我們,我們將竭誠(chéng)為您解答和服務(wù)。

 

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